ⅠNnükleik asitigiriş
Nükleik asit, deoksiribonükleik asit (DNA) ve ribonükleik asit (RNA) olarak ikiye ayrılır; bunların arasında RNA, farklı fonksiyonlarına göre ribozomal RNA (rRNA), haberci RNA (mRNA) ve transfer RNA (tRNA) olarak ayrılır.DNA esas olarak çekirdekte, mitokondride ve kloroformda yoğunlaşırken, RNA esas olarak sitoplazmada dağıtılır.Gen ifadesinin maddi temeli olarak nükleik asit ekstraksiyonu, moleküler biyoloji araştırmalarında ve klinik moleküler tanıda son derece önemli bir rol oynar.Nükleik asit ekstraksiyonunun konsantrasyonu ve saflığı sonraki PCR'yi, dizilimi, vektör yapısını, enzim sindirimini ve diğer deneyleri doğrudan etkileyecektir.
Ⅱ Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma yöntemi
① Fenol/kloroform ekstraksiyon yöntemi
Fenol/kloroform ekstraksiyonu, numuneleri işlemek için esas olarak iki farklı organik çözücü kullanan, su fazında DNA bazlı nükleik asidi, organik fazda lipitleri ve iki faz arasında proteinleri çözen klasik bir DNA ekstraksiyonu yöntemidir.Bu yöntem düşük maliyet, yüksek saflık ve iyi etki avantajlarına sahiptir.Dezavantajları karmaşık operasyon ve uzun zamandır.
② Trizol yöntemi
Trizol yöntemi, RNA ekstraksiyonu için klasik bir yöntemdir.Trizol yöntemi, RNA'nın sulu fazda çözündüğü, sulu fazın yeni bir EP tüpüne aktarıldığı, izopropanol eklendikten sonra çökeltme elde edildiği ve ardından etanol saflaştırmasının yapıldığı kloroform ile santrifüjlemeden sonra sulu faz ve organik faza ayrılır.Bu yöntem hayvan dokularından, hücrelerinden ve bakterilerden RNA ekstraksiyonu için uygundur.
③ Santrifüj kolon saflaştırma yöntemi
Santrifüj kolonu saflaştırma yöntemi, DNA'yı özel silikon matris adsorpsiyon malzemeleri aracılığıyla özel olarak adsorbe edebilir, RNA ve protein sorunsuz bir şekilde geçebilir ve daha sonra nükleik asidi ayırmak ve saflaştırmak için nükleik asit, düşük tuz yüksek PH değeri elüsyonunu birleştirmek için yüksek tuz düşük PH kullanabilir.Avantajları yüksek saflaştırma konsantrasyonu, yüksek stabilite, organik çözücüye gerek olmaması ve düşük maliyettir.Dezavantajı ise adım adım santrifüj edilmesi gerekmesi, daha fazla işlem adımı gerektirmesidir.
④ Manyetik boncuk yöntemi
Manyetik boncuk yöntemi, hücre dokusu numunesini lizat yoluyla bölmek, numunedeki nükleik asidi serbest bırakmak ve daha sonra nükleik asit molekülleri, proteinler ve şekerler gibi safsızlıklar kalırken manyetik boncuğun yüzeyine spesifik olarak adsorbe edilir. sıvı.Hücre dokusunun bölünmesi, nükleik asit ile manyetik boncuk bağlanması, nükleik asit yıkama, nükleik asit elüsyonu vb. aşamalar yoluyla nihayet saf nükleik asit elde edilir.Avantajları, adımlı santrifüjlemeye gerek kalmadan basit çalışma ve kısa süreli kullanımdır.Düşük teknik gereksinimlere sahiptir ve otomatik ve toplu çalışmayı gerçekleştirebilir.Manyetik boncuk ve nükleik asidin spesifik kombinasyonu, ekstrakte edilen nükleik asidin yüksek konsantrasyon ve saflığa sahip olmasını sağlar.Dezavantajı ise mevcut piyasa fiyatının nispeten pahalı olmasıdır.
⑤ Diğer yöntemler
Yukarıdaki dört yönteme ek olarak kaynayarak parçalama, konsantre tuz yöntemi, anyonik deterjan yöntemi, ultrasonik yöntem ve enzimatik yöntem vb. vardır.
Ⅲ Nükleik asit ekstraksiyonunun türü
Foregene, dünyanın önde gelen Doğrudan PCR platformuna, çift sütunlu RNA İzolasyon platformuna (yalnızca DNA + yalnızca RNA) sahiptir.Ana ürünler arasında DNA/RNA izolasyon kitleri, PCR ve Direkt PCR reaktifleri moleküler laboratuvar reaktifleri serisi yer almaktadır.
① Toplam RNA ekstraksiyonu
Toplam RNA ekstraksiyon örnekleri arasında kan, hücreler, hayvan dokuları, bitkiler, virüsler vb. yer alır. RT-PCR, çip analizi, in vitro çeviri, moleküler klonlama, Dot Blot ve diğer deneyler.
Foregene bağlıRNA İzolasyon Kitleri
Hayvan Toplam RNA İzolasyon Kiti--Çeşitli hayvan dokularından yüksek saflıkta ve yüksek kalitede toplam RNA'yı hızlı ve verimli bir şekilde çıkarın.
Hücre Toplam RNA İzolasyon Kiti--Yüksek derecede saflaştırılmış ve yüksek kalitede toplam RNA, çeşitli kültür hücrelerinden 11 dakika içinde elde edilebilmektedir.
Bitki Toplam RNA İzolasyon Kiti--Düşük polisakkarit ve polifenol içeriğine sahip bitki örneklerinden yüksek kaliteli toplam RNA'yı hızla çıkarın.
Viral RNA İzolasyon Kiti--Plazma, serum, hücresiz vücut sıvıları ve hücre kültürü süpernatanları gibi örneklerden viral RNA'yı hızla izole edin ve saflaştırın.
② Genomik DNA ekstraksiyonu
Genomik DNA ekstraksiyon örnekleri arasında toprak, dışkı, kan, hücreler, hayvan dokuları, bitkiler, virüsler vb. yer alır. Genomik DNA ekstraksiyonu, enzim sindirimi, DNA kütüphanesi yapımı, PCR, antikor hazırlama, Western blot hibridizasyon analizi, gen çipi, yüksek -Verim sıralaması ve diğer deneyler.
Foregene bağlıDNA İzolasyon Kitleri
Hayvan Doku DNA İzolasyon Kiti--Hayvan dokuları, hücreleri vb. gibi birden fazla kaynaktan genomik DNA'nın hızlı ekstraksiyonu ve saflaştırılması.
Kan DNA Midi Kiti (1-5ml)--Antikoagüle edilmiş kandan (1-5ml) yüksek kaliteli genomik DNA'yı hızlı bir şekilde saflaştırın.
Bukkal Swab/FTA Kart DNA İzolasyon Kiti--Bukkal swab/FTA Kart örneklerinden yüksek kaliteli genomik DNA'yı hızlı bir şekilde saflaştırın.
Bitki DNA İzolasyon Kiti--Bitki örneklerinden (polisakkaritler ve polifenol bitki örnekleri dahil) hızlı bir şekilde saflaştırın ve yüksek kaliteli genomik DNA elde edin
③ Plazmid ekstraksiyonu
Plazmid, DNA rekombinasyonu için ortak bir taşıyıcı olan, hücrelerdeki bir tür dairesel küçük moleküllü DNA'dır.Plazmid ekstraksiyon yöntemi, RNA'nın çıkarılması, plazmidin bakteriyel genomik DNA'dan ayrılması ve nispeten saf plazmid elde etmek için protein ve diğer yabancı maddelerin uzaklaştırılmasıdır.
Genel Plazmid Mini Kit--Dönüşüm ve enzim sindirimi gibi rutin moleküler biyoloji deneyleri için yüksek kaliteli plazmid DNA'yı dönüştürülmüş bakterilerden hızla arındırın
④ Diğer ekstraksiyon türleri, miRNA ekstraksiyonu vb.
Hayvan miRNA İzolasyon Kiti--Çeşitli hayvan dokularından ve hücrelerinden 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA'nın küçük RNA parçalarını hızlı ve verimli bir şekilde çıkarın
Ⅳ Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma sonucu için gerekliliklers
① Nükleik asidin birincil yapısının bütünlüğünü sağlamak.
② Proteinlerin, şekerlerin, lipitlerin ve diğer makromoleküllerin girişimini azaltın
③ Nükleik asit numunelerinde enzimi inhibe edebilecek organik solvent veya yüksek konsantrasyonda metal iyonu bulunmamalıdır.
④ DNA ekstrakte edilirken RNA ve diğer nükleik asit kontaminasyonu ortadan kaldırılmalıdır veya bunun tersi de geçerlidir.
Gönderim zamanı: 24 Kasım 2022
