ⅠNnükleik asitigiriş
Nükleik asit, deoksiribonükleik asit (DNA) ve ribonükleik asit (RNA) olarak ikiye ayrılır; aralarında RNA, farklı işlevlerine göre ribozomal RNA (rRNA), haberci RNA (mRNA) ve transfer RNA'ya (tRNA) ayrılır.DNA esas olarak çekirdek, mitokondri ve kloroformda yoğunlaşırken, RNA esas olarak sitoplazmada dağılmıştır.Gen ekspresyonunun maddi temeli olarak nükleik asit ekstraksiyonu, moleküler biyoloji araştırmalarında ve klinik moleküler teşhiste son derece önemli bir rol oynar.Nükleik asit ekstraksiyonunun konsantrasyonu ve saflığı sonraki PCR'yi, sıralamayı, vektör yapımını, enzim sindirimini ve diğer deneyleri doğrudan etkileyecektir.
Ⅱ Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma yöntemi
① Fenol/kloroform ekstraksiyon yöntemi
Fenol/kloroform ekstraksiyonu, DNA bazlı nükleik asidi su fazında, lipidleri organik fazda ve proteinleri iki faz arasında çözerek, numuneleri işlemek için esas olarak iki farklı organik çözücü kullanan klasik bir DNA ekstraksiyonu yöntemidir.Bu yöntem, düşük maliyet, yüksek saflık ve iyi etki avantajlarına sahiptir.Dezavantajları karmaşık işlem ve uzun süredir.
② Trizol yöntemi
Trizol yöntemi, RNA ekstraksiyonu için klasik bir yöntemdir.Trizol yöntemi, kloroform ile santrifüjlendikten sonra sulu faz ve organik faz olarak ayrılır, burada RNA sulu fazda çözülür, sulu faz yeni bir EP tüpüne aktarılır, izopropanol eklendikten sonra çökeltme elde edilir ve ardından etanol saflaştırması yapılır.Bu yöntem, hayvan dokularından, hücrelerden ve bakterilerden RNA ekstraksiyonu için uygundur.
③ Santrifüj sütun arıtma yöntemi
Santrifüj kolon saflaştırma yöntemi, DNA'yı özel olarak özel silikon matris adsorpsiyon malzemeleri aracılığıyla adsorbe edebilirken, RNA ve protein sorunsuz bir şekilde geçebilir ve daha sonra nükleik asidi ayırmak ve saflaştırmak için nükleik asidi, düşük tuzlu yüksek PH değeri elüsyonunu birleştirmek için yüksek tuz düşük PH kullanır.Avantajları, yüksek saflaştırma konsantrasyonu, yüksek kararlılık, organik çözücüye gerek olmaması ve düşük maliyettir.Dezavantajı, adım adım santrifüj edilmesi, daha fazla işlem adımı gerektirmesidir.
④ Manyetik boncuk yöntemi
Manyetik boncuk yöntemi, hücre dokusu numunesini lizat yoluyla bölmek, numunedeki nükleik asidi serbest bırakmak ve daha sonra nükleik asit molekülleri, proteinler ve şekerler gibi safsızlıklar kalırken, manyetik boncuk yüzeyinde spesifik olarak adsorbe edilir. sıvı.Hücre dokusunun bölünmesi, nükleik asitle manyetik boncuk bağlama, nükleik asit yıkama, nükleik asit elüsyonu vb. aşamalardan geçerek, nihayet saf nükleik asit elde edilir.Avantajları, kademeli santrifüjlemeye ihtiyaç duymadan basit çalışma ve kısa süreli kullanımdır.Düşük teknik gereksinimlere sahiptir ve otomatik ve toplu çalışmayı gerçekleştirebilir.Manyetik boncuk ve nükleik asidin özel kombinasyonu, ekstrakte edilmiş nükleik asidi yüksek konsantrasyon ve saflıkta yapar.Dezavantajı, mevcut piyasa fiyatının nispeten pahalı olmasıdır.
⑤ Diğer yöntemler
Yukarıdaki dört yönteme ek olarak, kaynama krakingi, konsantre tuz yöntemi, anyonik deterjan yöntemi, ultrasonik yöntem ve enzimatik yöntem vb.
Ⅲ Nükleik asit ekstraksiyonu türü
Foregene, dünyanın önde gelen Doğrudan PCR platformuna, çift kolonlu RNA İzolasyon platformuna (yalnızca DNA + yalnızca RNA) sahiptir.Ana ürünler arasında DNA/RNA izolasyon kitleri, PCR ve Direkt PCR reaktifleri moleküler laboratuvar reaktifleri serisi bulunmaktadır.
① Toplam RNA ekstraksiyonu
Toplam RNA ekstraksiyon numuneleri arasında kan, hücreler, hayvan dokuları, bitkiler, virüsler vb. bulunur. Toplam RNA'nın yüksek saflığı ve yüksek konsantrasyonu, RT-PCR, çip analizi, in vitro çeviride kullanılabilen toplam RNA ekstraksiyonu yoluyla elde edilebilir. moleküler klonlama, Dot Blot ve diğer deneyler.
Foregene ile ilgiliRNA İzolasyon Kitleri
Hayvan Total RNA İzolasyon Kiti--Çeşitli hayvan dokularından yüksek saflıkta ve yüksek kaliteli toplam RNA'yı hızlı ve verimli bir şekilde çıkarın.
Hücre Toplam RNA İzolasyon Kiti--Yüksek oranda saflaştırılmış ve yüksek kaliteli toplam RNA, 11 dakikada çeşitli kültürlenmiş hücrelerden elde edilebilir.
Bitki Toplam RNA İzolasyon Kiti--Düşük polisakkarit ve polifenol içeriğine sahip bitki örneklerinden yüksek kaliteli toplam RNA'yı hızla çıkarın.
Viral RNA İzolasyon Kiti--Plazma, serum, hücresiz vücut sıvıları ve hücre kültürü süpernatanları gibi örneklerden viral RNA'yı hızla izole edin ve saflaştırın.
② Genomik DNA ekstraksiyonu
Genomik DNA ekstraksiyon numuneleri arasında toprak, dışkı, kan, hücreler, hayvan dokuları, bitkiler, virüsler vb. -verim sıralaması ve diğer deneyler.
Foregene ile ilgiliDNA İzolasyon Kitleri
Hayvan Doku DNA İzolasyon Kiti--Hayvan dokuları, hücreler vb. gibi birden fazla kaynaktan genomik DNA'nın hızlı ekstraksiyonu ve saflaştırılması.
Kan DNA Midi Kiti (1-5ml)--Yüksek kaliteli genomik DNA'yı pıhtılaşma önleyici kandan (1-5 ml) hızla arındırın.
Bukkal Swab/FTA Kartı DNA İzolasyon Kiti--Bukkal sürüntü/FTA Kartı örneklerinden yüksek kaliteli genomik DNA'yı hızla arındırın.
Bitki DNA İzolasyon Kiti--Bitki örneklerinden (polisakkaritler ve polifenol bitki örnekleri dahil) hızlı bir şekilde saflaştırın ve yüksek kaliteli genomik DNA elde edin
③ Plazmid ekstraksiyonu
Plazmid, DNA rekombinasyonu için ortak bir taşıyıcı olan hücrelerde bir tür dairesel küçük moleküllü DNA'dır.Plazmid ekstraksiyonu yöntemi, nispeten saf plazmit elde etmek için RNA'yı, plazmidi bakteriyel genomik DNA'dan ayırmak ve protein ve diğer safsızlıkları uzaklaştırmaktır.
Genel Plazmit Mini Kiti--Transformasyon ve enzim sindirimi gibi rutin moleküler biyoloji deneyleri için dönüştürülmüş bakterilerden yüksek kaliteli plazmid DNA'yı hızla arındırın
④ Diğer ekstraksiyon türleri, miRNA ekstraksiyonu vb.
Hayvan miRNA İzolasyon Kiti--Çeşitli hayvan dokularından ve hücrelerinden 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA'nın küçük RNA parçalarını hızlı ve verimli bir şekilde çıkarın
Ⅳ Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma sonucu için gereksinimlers
① Nükleik asidin birincil yapısının bütünlüğünü sağlamak.
② Proteinlerin, şekerlerin, lipidlerin ve diğer makromoleküllerin etkileşimini azaltın
③ Nükleik asit numunelerinde enzimi inhibe edebilecek organik solvent veya yüksek konsantrasyonda metal iyonları olmamalıdır.
④ DNA ekstrakte edilirken RNA ve diğer nükleik asit kontaminasyonu ortadan kaldırılmalıdır ve bunun tersi de geçerlidir.
Gönderim zamanı: Kasım-24-2022
